Прогностические возможности метода клиновидной дегидратации
  1. А.И. Шихлярова Ph. D.
    ФГБУ Ростовский НИИ Онкологический институт Минздрава РФ
  2. Е.А Шейко Ph. D.
    esheiko at inbox dot ru
    ФГБУ Ростовский НИИ Онкологический институт Минздрава РФ
DOI
http://dx.doi.org/10.13070/rs.ru.1.578
Дата
2014-02-09
Цитировать как
Research ru 2014;1:578
License
Абстракт
изучить морфологическую картину дегидратированных пленок сыворотки крови (фаций) у детей грудного возраста с гемангиомой, на этапах лечения методом монохромного светодиодного излучения. Материалы и методы: образцы фаций сыворотки крови, получены от 5 практически здоровых детей и 25 грудных детей с гемангиомой, до и на этапах лечения. Микроскопию структур осуществляли с помощью микроскопа LEICA DM SL2 с компьютерным обеспечением программы «Морфотест». Результаты: структурные изменения фаций сыворотки крови на этапах лечения отражают изменения, как в организме ребенка, так и в структуре опухоли. Были выявлены критерии, свидетельствующие о склерозировании опухоли– структуры типа листа. Заключение: описанный метод может быть использован в прогнозе эффективности лечения детей с гемангиомами.
English Abstract
Purpose: to examine the morphological structures of the solid phase of blood serum of first year children with hemangiomas response to the influence of red light diode irradiation. Material and methods: patients from the control group (5 children) and main group (20 children) had the morphological blood serum investigation with the wedge-shaped dehydration method. Results: as it have shown that changes going on in the whole children organism and in hemangioma under the red light diode therapy are reflected in the morphological picture of solid phase of blood serum. It has been found the tumor sclerogenic criterion – characterized by structures like the leaf. Conclusion: the wedge-shaped dehydration method is recommended in children to estimate effectiveness of red light diode therapy.

Из всех доброкачественных новообразований у детей раннего возраста гемангиомы кожи, мягких тканей и слизистых оболочек достаточно распространенное заболевание и со-ставляет по данным различных авторов от 50 до 80% . Они встречаются у 1,1-2,6% всех ново-рожденных, а к концу первого года жизни этот показатель увеличивается до 10,1% и характери-зуются быстрым местно - деструирующим ростом. Процент детей с пролиферирующими кож-но-подкожными формами гемангиом, осложненных изъязвлениям, воспалением, кровотечением и долго не заживающими ранами на фоне быстрого роста опухолей, продолжает увеличиваться [11]. В связи с этим, проблема эффективного лечения таких грудных детей с гемангиомами остается актуальной и по сей день.

Для проведения успешной терапии этих сосудистых опухолей необходимо внедрение научно-обоснованных современных технологий. Среди новых медицинских технологий представлена методика селективной светодиодной монохромотерапии с излучением красного света в лечении осложненных и быстрорастущих гемангиом у детей первого года жизни. Предлагаемая методика является неинвазивной, что позволяет использовать ее при лечении детей раннего грудного возраста с гемангиомами критических локализаций (голова и шея, половые органы, грудные железы, места естественных складок кожи, суставные поверхности). Высокая эффек-тивность медицинской технологии - метода фотохромотерапии (ФХТ) заключается не только в достижении локального (на опухоль) лечебного результата, но и повышении общего защитно-компенсаторного потенциала – иммуностимулирующего и антистрессорного влияния [10].

Применение метода ФХТ основано на способности монохромного красного света инду-цировать в организме ребенка фотобиоадаптивные процессы, приводящие к вазодилятации микрососудов, активации процессов склерозирования основных питающих сосудов в опухоли, активации гуморальных факторов регуляции локального кровотока, индукции репаративных, регенеративных реакций тканей с повышением синтетической, фагоцитарной активности нейтрофилов и росту показателей лимфоидного звена иммунитета, что способствует стабилиза-ции роста и регрессу сосудистых новообразований кожи. Фототерапия монохромным красным светом также приводит к улучшению состояния перекисного и энергетического метаболизма, гармонизации внутренних процессов организма и повышению неспецифической резистентно-сти ребенка [10].

Современное понимание изменений, происходящих в гемангиоме во время лечения, в том числе и методом ФХТ, невозможно без поиска и оценки сигнальных информативных кри-териев, отражающих основные процессы склерозирования в этой сосудистой опухоли, раскры-вающие суть воздействия светодиодного излучения. Одним из основных акцепторов такого эф-фекта могут быть биологические жидкости, в частности сыворотка крови. [8]. Известно, что биологические жидкости играют важную роль в жизнедеятельности организма, выполняя ин-формационную, управленческую и исполнительную функции [1] [5]. Биологические жидкости отражают состояние гомеостаза и представляют наиболее удобный для изучения динамики фи-зиологических и патологических процессов организма объект. [2] [3] [4] [6] [8] [9]. Клиновидная де-гидратация обуславливает особые условия самоорганизации, в результате формируется твердо-тельная пленка (фация) со специфическими структурами, представляющими собой индивиду-альные биологические параметры. Фация - это структурный макропортрет, отражающий моле-кулярные взаимоотношения в биологической жидкости, а значит и протекающие в ней патофи-зиологические процессы. В этом состоит наибольшая ценность метода клиновидной дегидрата-ции для клинической диагностики. Ни один другой метод лабораторной диагностики не дает интегральной информации столь значительного объема и качества [7] [8] [9].

В процессе самоорганизации при клиновидной или краевой дегидратации биологиче-ских жидкостей специфические структуры данных молекул формируют системные, подсистем-ные и локальные структуры надмолекулярного уровня, доступные для визуального анализа. Выявлен ряд локальных морфологических структурированных маркеров, указывающих на определённый патологический процесс, в том числе и процесс склерозирования сосудов. [1] [3] [5] [9]. У грудных детей с гемангиомами регресс этой сосудистой опухоли обусловлен склерозиро-ванием основных, питающих сосудов гемангиомы, в связи с чем, выявление маркеров этого процесса может свидетельствовать об эффективности проводимых лечебных мероприятий и выявления резервов здоровья ребенка, принятия, своевременных мер по укреплению и преду-преждению истощения этих резервов.

Целью нашего исследования явилось изучение морфологической картины дегидратиро-ванных пленок сыворотки крови и выявление маркеров склерозирования у детей грудного воз-раста больных гемангиомой, на этапах лечения методом ФХТ.

Прогностические возможности метода клиновидной дегидратации Рисунок 1
Рисунок 1. Патологический аморфный тип фации сыворотки крови ребенка с гемангиомой до лечения, нити псевдомицелия кандид.

Материал и методы. В работе исследованы пробы сыворотки крови, взятой от 25 де-тей до года с диагнозом гемангиома кожи на этапах фотохромотерапии и 5 практически здо-ровых детей. Кровь брали до лечения, после первого курса, после второго курса, после треть-его курса ФХТ, через год после исцеления и у здоровых детей (по пять человек в каждой группе).

Осуществляется забор венозной крови в сухую чистую пробирку в объеме 5 мл для по-лучения сыворотки. Кровь центрифугируется в течение 30 минут со скоростью 1000 оборотов в минуту. Полученная сыворотка в объеме 10 мкл наносится на специально подготовленное обезжиренное предметное стекло в строго горизонтальном положении. Высушивание произво-дится при постоянной температуре 24о и постоянной влажности 65%. В процессе высыхания предметное стекло остается неподвижно в строго горизонтальном положении и полном отсут-ствии движения окружающего воздуха. Оценка структурообразующих элементов производи-лась через 24 ч. [9]. Микроскопию структур осуществляли с помощью микроскопа LEICA DM SL2 с компьютерным обеспечением программы «Морфотест». Морфологические исследования проводили в проходящем свете, темном поле и с помощью поляризационной микроскопии с увеличением х5,х10,х40,х100.

Прогностические возможности метода клиновидной дегидратации Рисунок 2
Рисунок 2. Фации сыворотки крови ребенка после первого курса ФХТ. Начальное проявление системных свойств частично- радиальной симметрией трещин, локальные проявления: а) формирование в промежуточной зоне фации мелких; б). Формирование в краевой зоне фации укрупненных структур типа «листа».

Одним из наиболее важных интегральных критериев структурной самоорганизации биологических жидкостей является определения типов фаций, к которым относят радиальный, частично-радиальный , иррадиальный , циркулярный, аморфный, типы и двойную фацию.

Тип фации, отражающий характер симметрии, количество и форму, основных систем-ных и подсистемных критериев – трещин, отдельностей, конкреций, может быть физиологиче-ским: радиальным и (или) частично-радиальный, и патологическим: иррадиальным, циркуляр-ным, аморфным, двойной фацией. Для определения фаций и их структурного типа, физиологи-чески устойчивого или неустойчивого или патологически устойчивого или неустойчивого, на 2-е сутки проводили повторное раскапывание образца сыворотки крови ребенка.

Изучена морфологическая картина сыворотки крови у пяти групп детей до года по пять человек в группе: первая группа до лечения, вторая группа после первого курса ФХТ, третья группа после второго курса ФХТ, третья группа после третьего курса ФХТ, четвертая группа через год после излечения, пятая контрольная группа практически здоровых детей (без геман-гиом).

Результаты и их обсуждение. При идентификации фаций сыворотки крови у грудных детей с осложненными гемангиомами до начала ФХТ оказалось, что в общегрупповой выборке доминируют фации с крайне низким уровнем структурирования: текстура фации была аморф-ного или иррадиального типа, патологически устойчива.Рис.1

Прогностические возможности метода клиновидной дегидратации Рисунок 3
Рисунок 3. Фации сыворотки крови ребенка после второго курса ФХТ:а) Радиальный тип симметрии трещин фации, формирование отдельностей и конкреций; б)Радиальный тип фации сыворотки крови, удлинение трещин, формирование отдельностей и конкреций, слияние структур типа «листа».

При микроскопии твердотельных пленок сыворотки крови детей уже после первого курса ФХТ наблюдалось восстановление процессов самоорганизации первого уровня. Это вы-ражалось в смене патологических типов фаций на физиологические : у подавляющего боль-шинства детей формировался. частично - радиальный тип симметрии, только у одного ребенка тип фации был радиальным. Однако выявлялись локальные патологические образования – мар-керы гипоксических (структуры типа «жгутов»), воспалительных («ковры Серпинского» и «языки Арнольда») процессов, ангиоспазма (гребешковые структуры), которые указывали на наличие сопутствующей патологии у детей с осложненными формами гемангиом. Наиболее информативным признаком ответной реакции опухоли на воздействие ФХТ служило появление маркеров склерозирования – структур типа «листа» вдоль трещин промежуточной зоны фации (рис. 2а), а затем и вдоль трещин в краевой зоне (рис. 2б). Образование этих структур, по мне-нию Шабалина В.Н., Шатохиной С.Н.(6), связано с вертикальным перераспределением опреде-ленных групп сывороточных белков.

Прогностические возможности метода клиновидной дегидратации Рисунок 4
Рисунок 4. Фация сыворотки крови ребенка после третьего курса ФХТ. Радиальный тип фации, удлинение трещин, формирование отдельностей и конкреций.
процессов и ангиоспазма (широкие радиальные трещины, ковры Серпинского, структуры типа «листа», жгутовые обра-зования и «незавершенные конкреции», гребешковые структуры). Эти изменения в морфологии биожидкости указывали на изменения гомеостатических процессов в организме ребенка, направленных на склерозирование сосудов в гемангиоме, о чем свидетельствует появление у большинства детей сигнальных маркеров склерозирования - структуры типа «листа». Однако на этом этапе ФХТ такие изменения носят физиологически неустойчивый характер. (Рис.2 а, б).

Визуализация гемангиом свидетельствовала о появлении мелких светлых пятен по ее поверхности, свидетельствующих о начале процессов склерозирования.

Изучение признаков фаций сыворотки крови детей с гемангиомами после второго кур-са ФХТ указывало на возможность восстановления нормотипов морфоструктуры, в пользу про-тивоопухолевого и биоадаптивного влияния ФХТ. (Рис 3а, б)

Прогностические возможности метода клиновидной дегидратации Рисунок 5
Рисунок 5. Фация ребенка после исцеления от гемангиомы, методом ФХТ:а) Радиальный тип трещин, формирование секторов, отдельностей и конкреции. б). Фация ребенка через год после исцеления от гемангиомы методом ФХТ. Радиальный тип трещин, отдельности и конкреции. Маркеры патологических процессов отсутствуют.

Это подтверждается иным структура построением фаций: тип симметрии трещин стал радиальным, произошло формирование отдельностей и конкреций, все это указывает на норма-лизацию первого и второго уровня самоорганизации. Однако у некоторых детей выявлялись фации сыворотки крови с трещинами атипичными по размеру: либо укороченными до полови-ны радиуса фации, либо большой длины, пересекающей всю окружность фации.

Визуализация гемангиом свидетельствовала о появлении крупных светлых склеротиче-ских полей по всей ее поверхности, опухоль стала «проседать», при пальпации–мягкая.

После третьего курса ФХТ структура фаций сыворотки крови приближалась к нормо-типу таковой у детей без гемангиом, условно здоровых. Маркеры склерозирования отсутство-вали. Рис 4. Обследования фаций сыворотки крови детей, проведенные через год после исцеле-ния, указывало на появление нормотипов с четкой радиальной структурой трещин, таких же как у здоровых детей. Отсутствовали маркеры патологических процессов: воспаления, гипоксии, склерозирования. При визуализации на месте опухоли определяется мягкий соединительно тка-ный рубец.

Прогностические возможности метода клиновидной дегидратации Рисунок 6
Рисунок 6. Фация сыворотки крови условно здорового ребенка без гемангиомы.

Картина фаций сыворотки крови условно здоровых детей характеризуется рядом при-знаков: фация имеет симметричные радиальные трещины, прямоугольные отдельности, круго-вые конкреции небольшого размера.Рис.6.

Клиническая картина детей характеризовалась следующим образом: после первого курса ФХТ регресс гемангиом регистрировался практически у половины детей, при кавер-нозных гемангиомах только 15%. По данным УЗИ происходило уменьшение размеров опу-холи на 46%-71%, уменьшение скорости кровотока в 11%-22%, формирование капсулы реги-стрировалась в 40% случаев. После второго и третьего курсов ФХТ процент детей с регрес-сом опухоли нарастал. У детей отмечалось уменьшение размеров опухоли на 98%, регистри-ровали слабый периферический кровоток или его отсутствие в 96%, четкие границы или наличие капсулы в 98%, отсутствие питающего сосуда в 80% случаев. После четвертого кур-са у всех оставшихся детей с простыми формами гемангиом была достигнута регрессия, у остальных детей, с другими формами гемангиом, увеличился процент стабилизаций и ре-грессов. В случаях, осложненных изъязвлениями гемангиом, ходе ФХТ были получены дан-ные о местном влиянии монохроматического низкоинтенсивного красного излучения на гнойно-воспалительные процессы в области раны гемангиом: происходила активация соеди-нительно тканных элементов (фибробластов, гистиоцитов, макрофагов, лимфоцитов, повы-шение бактерицидности нейтрофилов), что приводило к ускорению очищения раны от некротических масс, сокращению более чем в два раза экссудативной фазы воспалительного процесса с одновременным развитием грануляционной ткани, эпителизация раны, в среднем, завершалась на пятые сутки после начала световой терапии, что значительно меньше кон-трольных значений в три-пять раз. (Рис 7 а,б,в)

Прогностические возможности метода клиновидной дегидратации Рисунок 7
Рисунок 7. а) Осложненная изъязвлением гемангиома до лечения. б) Гемангиома после первого курса ФХТ. в) Гемангиома после третьего курса ФХТ, широкие поля склерозирования, мягкий рубец.

Таким образом, после проведения анализа критериев кристаллизации, определения си-стемных, подсистемных локальных признаков самоорганизации жидкостей, а также маркеров патологических процессов в сыворотке крови детей, на этапах лечения ребенка методом ФХТ, было установлено, что происходит восстановление I и II уровней самоорганизации (системных концентрационных волн, радиальной симметрии трещин, появление отдельностей и конкреций). Уже после второго курса ФХТ в морфологии сыворотки крови определялись четкие критерии склерозирования сосудов гемангиомы, при этом снижалось встречаемость маркеров патологиче-ских процессов: воспалительных, гипоксии, интоксикации. После завершения курсов ФХТ мор-фотип фаций не отличался от такового здоровых детей.

Заключение. В результате применения метода клиновидной дегидратации сыворотки крови у детей с гемангиомами уже через 18-24 часа можно дать оценку эффективности и прове-сти коррекцию, проводимой светодиодной фотохромотерапии.

Ссылки
  1. Гребенников А.С., Бузоверя М.Э.,Шишпор И.В. и др. Разработка неинвазивного спосо-ба диагностики эндогенной интоксикации. //Мат.межд.конф. «Процессы самоорганиза-ции в высыхающих каплях», Астрахань: Изд. Астр.Гос.Университ, 2010. С.162-171.
  2. Камакин Н.Ф., Мартусевич А.К. Кристаллография биологических жидкостей как метод и ее физико-химических свойств //БЭБиМ.2007.№3.С.358-360.
  3. Максимов С.А.Морфология твердой фазы биологический жидкостей как метод диагно-стики в медицине //Бюллетень сибирской медицины. 2007.№ 4.С.80-85.
  4. Мартусевич А.К. Исследования кристаллогенеза биосубстратов как способ раскрытия их информативной емкости //Успехи совр.естествознания. 2006.№9.С.86-87.
  5. Потехина Ю.П. Отражение патологических процессов в морфологии биожидкостей.М.:Lambert.2001.172.
  6. Шабалин В.Н., Шатохина С.Н. Морфология биологических жидкостей человека.М.: Хризостом. 2001.303.
  7. Шабалин В.Н., Шатохина С.Н., Бузоверя М.Э. и др. Морфологический анализ биожид-костей при исследовании терапевтического действия низкоинтенсивных электромаг-нитных полей//Биомед.технологии и радиоэлектроника.2002.№2.С.49-52.
  8. Шабалин В.Н., Шатохина С.Н. Морфология биологических жидкостей в клинической лабораторной диагностике// Клиническая лаб.диагност.2002. №3.С.25-32.
  9. Шатохина С.Н., Шаболин В.Н. Маркеры злокачественного роста в морфологии биоло-гисеских жидкостей человека// Вопросы онкологии. 2010. Т.56 . №3.С.293-300.
  10. Шейко Е.А., Козель Ю.Ю. Фотохромотерапия в лечении гемангиом у детей//Лазерная медицина. 2011.Т.15.№3.С.33-38.
  11. Вruckner A.L., Frieden I.J./ Hemangiomas of infancy // J.Am.Acad.Dermatol. N.48, 2003, P.477-493.